 |
Для получения тонких (до 6 мкм) гистологических срезов необходимо фиксированный и промытый материал залить в плотную среду, предварительно пропитав ею кусочки тканей.
В зависимости от способа растворения все заливочные среды разделяют на растворимые в органических растворителях - парафин и пластические полимеры на его основе, целлоидин, и водорастворимые - желатин, полиэтиленгликоли, полиэфиры, некоторые метакрилаты и т.д.
Для заключения фиксированных объектов в парафин или целлоидин, использующиеся в практике наиболее часто, их предварительно подвергают обезвоживанию при помощи этилового спирта (реже применяют ацетон и другие спирты). Обезвоженные объекты перед заделкой в парафин проводят через промежуточные среды (ксилол, бензол, хлороформ, различные масла).
Из залитых в парафин или целлоидин блоков изготовляют срезы, которые затем окрашивают, обезвоживают, проводят через промежуточные среды и заделывают в канадский бальзам или его заменители (пихтовый бальзам, идитол и др.), если в описаниях специальных методов нет иных указаний.
Заливка в парафин является наиболее широко распространенным методом. Преимуществами методики являются относительная быстрота, возможность приготовлять весьма тонкие срезы (до 1-2 микрон) в виде серии, что особенно важно для гистологических и эмбриологических работ. К недостаткам парафиновой заливки следует отнести некоторое сжатие заливаемого материала (на 8-20%) и необходимость подвергать его действию относительно высокой температуры (56-58 градусов по Цельсию).
Заливка в целлоидин может быть рекомендована для трудно режущихся объектов и образцов, чрезмерно затвердевающих при парафиновой заливке (декальцинированная кость, кожа, толстые слои гладкой мускулатуры), а также в тех случаях, когда надо избежать воздействия высокой температуры. получаемые при целлоидиновой заливке срезы можно легко и удобно по отдельности проводить через различные растворы и красители.
Недостатками метода являются его длительность, трудность изготовления серийных срезов, относительную трудность наклейки срезов и большую толщину получаемых срезов в сравнении с парафиновыми. Следует также подчеркнуть, то целлоидиновая заливка требует применения полностью безводных реактивов, а объекты должны быть безукоризненно обезвожены. В настоящее время данный метод используется достаточно редко, поэтому упоминание о нем носит скорее исторический характер.
Заливку в целлоидин применяют:
1. для объектов, имеющих большие полости и лакуны;
2. для объектов, имеющих слои различной консистенции (например, членистоногие);
3. для объектов больших размеров, с которых трудно получить хорошие парафиновые срезы;
4. для изготовления толстых срезов, необходимых для специальных исследований.
Преимущества обоих способов - целлоидиновой и парафиновой заливки - скомбинированы в целлоидин-парафиновом методе, при котором объект сперва заливается в целлоидин, а затем заключается в парафин.
Заливка в желатин применяется для рыхлых и легко распадающихся тканей, подготовляемых для резки на крио-микротоме, а также при изучении жировых и липоидных включений, не переносящих действия спиртов, ксилола и т.п. При заливке в желатин происходит минимальное изменение объема объекта, что особо важно при изучении интерцеллюлярных пространств, рыхлой соединительной ткани и т.д.
Использованная литература:
1. "Микроскопическая техника" под редакцией Саркисова Д.С., М., 1996
2. Микроскопическая техника под редакцией Роскина Г.И. |